２００９年４月第３卷第８期Ｃｈｉｎ ＪＭ０ｄ ＤｒｕｇＡｐｐｌ，Ａｐｔ２００９，Ｖｏ１．３，Ｎｏ．８ ・１０５・ ［２］Ｓｅｉｎｓｈｅｉｍｅｒ Ｆ．Ｓｕｂｔｒｏｅｈａｎｔｅｒｉｃ ｆｒａｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｆｅｍｕｒ．Ｊ Ｂｏｎｅ Ｊｏｉｎｔ Ｓｕｒｇ（Ａｍ），１９７８，６０：３００－３０６． 骨折远期疗效观察和并发症分析．中华骨科杂志，１９９８，１８ （６）：３４７－３５１． ［３］韩一生，赵广跃，金格勒，等．改良型Ｇａｍｍａ钉治疗股骨转子间 ［４］荣国威，王承武，等．骨折．人民卫生出版社，２００４：９７３－９７７． ＥＬＩＳＡ法检测血清ＨＢＶ抗．ＨＢｃ假阳性的原因探讨 兰芯磁 【摘要】 目的探讨ＥＬＩＳＡ法检测乙肝病毒抗一ＨＢｅ假阳性的原因，提高检测结果的准确度。方法 采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），对４１０例血清先用一种试剂初检，再用另外两种试剂复检，初检呈阳 性反应而两种试剂复检均为阴性者判为假阳性。结果 在４０６份标本中用科华公司的试剂检测到抗－ ＨＢｃ阳性标本３４８份，用英科兴创公司的试剂检测到抗一ＨＢｃ阳性标本３５５份，二者符合率为９８．Ｏ％。其 中５２份标本用两种试剂复查后抗．ＨＢｅ均为阴性，假阳性占１２．８％。结论应该复查抗－ＨＢｃ。 用ＥＬＩＳＡ竞争法检测抗－ ＨＢｃ，由于非特异吸附和操作等多种原因易出现假阳性结果，尤其对于抗・ＨＢｓ和抗－ＨＢｅ同时阳性的标本 【关键词】ＥＬＩＳＡ法抗一ＨＢｅ；乙型肝炎；假阳性 近年来乙型肝炎血清标志检测多用酶联免疫吸附实验 （ＥＬＩＳＡ）竞争法（一步法），由于方法简便，速度快而备受欢 迎。但是用该方法进行抗．ＨＢｃ批量检测常常出现假阳 性”Ｊ。笔者对４０６份抗．ＨＢｅ阳性的标本进行了复查，现报 告如下。 份为阴性；Ｃ组７０份，复查后７份为阴性。三组标本复查抗－ ＨＢｃ的结果。 ３讨论 ＥＬＩＳＡ竞争法（一步法）检测抗．ＨＢｃ抗体，由于用多克 隆抗一ＨＢｃ和ＨＢｃＡｇ包被反应板，加入待检标本和酶标记的 １资料与方法 单克隆抗一ＨＢｃ，竞争结合ＨＢｃＡｇ，如果酶标抗体的加入滞后 于待检标本，很容易出现非特异性吸附，导致假阳性…。在 乙肝五项检测的实际操作中，如果用手工操作进行批量检 测，五块板（９６孔）全部加入标本约需要３０ ｍｉｎ。然后再加 入相应的酶标记抗体，酶标抗－ＨＢｃ的加入滞后于待检标本， １．１试剂ＨＢｓ－Ａｇ、抗一ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗一ＨＢｅ和抗一ＨＢｃ常规 批量检测试剂盒均购自科华生物技术有限公司。ＨＢｓ－Ａｇ、 抗一ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ检测试剂盒为“夹心法”，抗．ＨＢｅ和抗．ＨＢｃ 检测试剂盒为“竞争法”。抗一ＨＢｃ复查试剂盒分别购于科华 生物技术有限公司和厦门英科兴创生物有限公司，为“竞争 法”。 致使标本中非特异抗体吸附到包被的ＨＢｃＡｇ，而阻碍酶标 抗．ＨＢｃ的结合，出现假阳性。笔者对４Ｏ６份抗．ＨＢｃ阳性标 本进行复查，结果发现５２份为假阳性，假阳性率１２．８％。尤 其是结果为ＨＢｓＡｇ（一）、抗一ＨＢｓ（＋）、ＨＢｅＡｇ（ ）、抗一Ｈｂｅ（＋ １．２标本均来自本院２００８年５～７月乙肝“两对半”检测 标本，其中抗－ＨＢｃ阳性标本４０６份，根据不同模式分为三组： Ａ组、大三阳或小三阳，共２２０份；Ｂ组ＨＢｓ．Ａｇ（．）、抗．ＨＢｓ （＋）、ＨＢｅＡ、抗一ＨＢｅ（＋或一）、抗．ＨＢｃ（＋），共１１６份；Ｃ组其 他模式，７０份。 或・）、抗－ＨＢｃ（＋）模式的标本，抗．ＨＢｃ假阳性率高达 ３４．４％。对于抗．ＨＢｓ阳性者，抗一ＨＢｃ阳性与否其临床结果 明显不同，因为抗－ＨＢｓ和抗一ＨＢｃ同时阳性可能为急性乙肝、 慢性乙肝或携带者 ｌ３］。标本溶血、标本被细菌污染、标本贮 存时间过长和标本凝固不全、试剂盒的抗原不纯、采用多克 隆抗体和酶结合物纯度低等都可导致假阳性结果。【４］。 因此，建议各检测单位在检测抗．ＨＢｃ时，标本要充分离 心，并尽绩使血清和酶结合物同步加入，以减少非特异吸附， １．３方法常规检测：采集静脉血，在标本凝固后离心 （３０００ｇ，５ ｒａｉｎ），ＨＢｓ－Ａｇ、抗一ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗一ＨＢｅ和抗－ＨＢｃ 五项指标同时批量检测，五块板条同时加入待检血清，标本 全部加入约需３０ ｍｉｎ，然后再加入酶标记的相应抗体，即酶 标抗体的加入滞后于血清标本约３０ ｒａｉｎ。其余步骤严格按 说明书操作。抗一ＨＢｃ复查实验：每次“两对半”常规检测后， 挑选抗－ＨＢｅ阳性的标本，高速离心（５０００ｇ，１０ ｍｉｎ），然后分 降低假阳性。对于ＨＢｓＡｂ和抗－ＨＢｃ同时阳性的标本，应该 复查抗－ＨＢｃ。 别用科华生物技术有限公司和厦门英科兴创生物有限公司 的试剂盒复查抗一ＨＢｃ，严格按说明书操作。基本保证血清与 酶结合物同时加人。 ２结果 参考文献 ［１］ 黄作美，黄光华，陈江萍．ＥＬＩＳＡ一步法检测乙型肝炎抗一ＨＢｅ、 抗－ＨＢｅ存在假阳性．上海医学，１９９７，２０（２）：１００－１０３． ２．１在４０６份标本中用科华公司的试剂检测到抗．ＨＢｃ阳性 标本３４８份，用英科兴创公司的试剂检测到抗．ＨＢｃ阳性标 ［２］ 张红．血清ＨＢＶ—Ｍ中抗一ＨＢｓ、抗－ＨＢｅ、抗－ＨＢｃ同时阳性的临床 意义．中国冶金医学工业医学杂志，２００５，２（３）：３６７￣６８． 本３５５份，二者符合率为９８．Ｏ％。其中５２份标本用两种试 剂复查后抗一ＨＢｃ均为阴性，假阳性率占１２．８％。两种复查 ［３］张永祥，孙南雄，刘雁雁，等．抗．ＨＢｅ、抗一ＨＢｃ及抗体．ＨＢＣ抗体 阳性伴ＡＬＴ值升高３Ｏ例随访观察．江苏医学杂志，２００１．２１ （１２）：９０４－９０５． 实验结果的符合率９８．０％。 ２．２三组标本复查抗－ＨＢｃ的结果在３１０份抗．ＨＢｃ阳性标 本中，Ａ组２２０份，复查后４份为阴性；Ｂ组１１６份，复查后４０ 作者单位：４６２０００河南省漯河市第二人民医院 ［４］ 李金明．感染性疾病血清学检验中应重视对弱反应性标本的 确认．中华检验医学杂志，２００６，２９（７）：５７７－５８０．