２０１８年７月 第２０卷第７期 中国现代中药Ｍｏｄ Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ Ｊｕ１．２０１８ Ｖｏ１．２０ Ｎｏ．７ ·基础研究· 延胡索块茎中延胡索乙素含量分布的研究△ 胡珂 ，何忠臻 ，彭华胜 ，詹志来 （１．安徽中医药大学药学院 安徽省道地中药材品质提升协同创新中心，安徽合肥２３００１２； ２．中国中医科学院中药资源中心道地药材国家重点实验室培育基地，北京１００７００） ［摘要］ 目的：初步确定延胡索块茎中不同部位的延胡索乙素含量。方法：手工剥离延胡索块茎的颓废组织、 表皮、韧皮部、木质部及髓四个部分，粉碎后过《中华人民共和国药典》三号筛，用高效液相色谱法测定各部分的 延胡索乙素含量，流动相甲醇：水（６９：３１）等度洗脱，流速为１．０ ｍＬ·ｍｉｎ～，检测波长为２８０ ｎｍ。结果：颓废组织、 表皮、韧皮部、木质部及髓四个部位中均含有延胡索乙素，且韧皮部中含量最低，颓废组织与表皮中含量接近。结论： 延胡索块茎的颓废组织仍有药用价值，应对其进一步加以利用；目前《中华人民共和国药典》中以粒径大小来划分延 胡索商品规格等级的方法有待商榷。 ［关键词］延胡索块茎；延胡索乙素；含量分布；高效液相色谱 Ｃｏｎｔｅｎｔ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｉｐａｌｍａｔｉｎｅ ｉｎ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｔｕｂｅｒ （ＨＵ Ｋｅ ，ＨＥ Ｚｈｏｎｇ．ｚｈｅｎ ＰＥＮＧ Ｈｕａ—ｓｈｅｎｇ ．ＺＨＡＮ Ｚｈｉ．１ａｉ （１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ａｎｈｕｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ＆Ｓｙｎｅｒｇｅｔｉｃ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ ｆ ｏＡｎｈｕ Ａｕｔｈｅｎｔｉｃ Ｃｈｉｅｓｅｎ Ｍｅｄｉｃｉｅ Ｑｕａｌｎｉｔｙ Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ，Ｈｅｆｅｉ ２３００１２．Ｃ＾ｉｎａ： ２．Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ Ｂａｓｅ ｏｆ Ｄａｏ—ｄ Ｈｅｒｂｓ．Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｃｈｉｅｓｎｅ Ｍａｔｅｒｉａ Ｍｅｄｉｃａ． Ｃｈｉｎａ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １００７００， ｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］０ｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐａｌｍａｔｉｎｅ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｒｔｓ ｏｆ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｔｕ— ｂｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｄｅｃａｄｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅ，ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ，ｐｈｌｏｅｍ，ｘｙｌｅｍ ａｎｄ ｍａｒｒｏｗ ｏｆ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｔｕｂｅｒ ｗｅｒｅ ｓｔｉｐｐｅｄ ｂｙ ｈａｎｄ，ｔｒｈｅｓｅ ｐａｒｔｓ ｗｅｒｅ ｃｒｕｓｈｅｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ｐｏｗｄｅｒｓ ｗｅｒｅ ｓｉｆｔｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｎｏ．３ ｓｉｅｖｅ．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐａｌｍａｔｉｎｅ ｉｎ ｅａｃｈ ｐａｒｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｒ－ ｍｉｎｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｍｉｘｔｕｒｅ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｎｄ ｗａｔｅｒ（ｍｅｔｈａｎｏｌ：ｗａｔｅｒ ６９：３ １）ａｓ ｔｈｅ ｅｌｕｅｎｔ ａｔ ａ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ １．０ ｍＬ·ｍｉｎ～．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ｓｅｔ ａｔ ２８０ Ｂｉｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐａｌｍａｔｉｎｅ ｅｘｉｓｔｓ ｉｎ ｄｅｃａｄｅｎｔ ｔｉｓ． ｓｕｅ，ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ，ｐｈｌｏｅｍ，ｘｙｌｅｍ ａｎｄ ｍｅｄｕｌｌａ．Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐａｌｍａｔｉｎｅ ｉｎ ｐｈｌｏｅｍ ｗａｓ ｔｈｅ ｌｏｗｅｓｔ，ａｎｄ ｔｈａｔ ｉｎ ｄｅｃａｄｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅ Ｗａｓ ｃｌｏｓｅ ｔｏ ｔｈａｔ ｉｎ ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ｔｈｅ ｄｅｃａｄｅｎｔ ｔｉｓｓｕｅ ｏｆ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｔｕｂｅｒ ｈａｓ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｖａｌｕｅ，ａｎｄ ｉｔ ｉｓ ｗｏｒｔｈ ｂｅｉｎｇ ｆｕｒｔｈｅｒ ｕｔｉｌｉｚｅｄ．Ｔｈｅ ｃｕｒｒｅｎｔ ｇｒａｄｉｎｇ ｆｏｒ ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ Ｒｈｉｚｏｍａ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅ ｎｅｅｄｓ ｔｏ ｂｅ ｄｉｓｃｕｓｓｅｄ． ［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｔｕｂｅｒ；ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｐａｌｍａｔｉｎｅ；ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ；ＨＰＬＣ ｄｏｉ：１０．１３３１３／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－４８９０．２０１８０２２６００６ 常用中药延胡索Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｙａｎｈｕｓｕｏ Ｗ．Ｔ．Ｗａｎｇ 部等不同部位中延胡索乙素的含量，结合前期市场 调查及产地现状对其品质进行分析评价，以期为今 为多年生植物，以干燥块茎入药，有活血、止痛作 用＿ｌｊ。延胡索最早记载于唐代陈藏器的《本草拾 遗》，是著名的浙八味之一ｌ２ Ｊ。根据前期调查，目前 市场上延胡索商品都以粒径大小进行等级划分，而 后延胡索产地加工方法的改进及商品规格等级的制 定起到参考作用。 １材料与仪器 且在全国最大产区的陕西，产地加工方法简陋，易 造成块茎颓废组织大量脱落，这些状况都会对正确 评价药材质量产生不利的影响。本实验采用高效液 相法分别测定延胡索块茎的颓废组织、表皮、韧皮 １．１材料 分别于２０１６年１１～１２月延胡索休眠期采集安 徽省合肥市大蜀山的野生块茎，由安徽毫州康美中 ［基金项目］ 安徽省教育厅自然科学重点研究项目（ＫＪ ２０１６ Ｋ ＪＡ８５５）；中央本级重大增减支项目（２０６０３０２） ［通信作者］ 胡珂，教授，研究方向：药用植物及中药栽培；Ｅ—ｍａｉｌ：１３９０４０９１６１＠ｑｑ．ｃｏｍ ·８２５· ２０１８年７月 第２０卷第７期 中国现代中药Ｍｏｄ Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ 药材市场、河北安国东方药城、四川荷花池中药材 专业市场、Ｊ 一西玉林市中药材专业市场购得栽培延 胡索药材商品，经胡珂教授鉴定为罂粟科植物延胡 索Ｃｏｒｙｄａｌｉｓ ｙａｎｈｕｓ￣ｏ Ｗ．Ｔ．Ｗａｎｇ的块茎。 １．２仪器 Ｍｉｌｌｉ—Ｑ Ａｄｖａｎｔａｇｅ Ａ１０一体式超纯水机（美国 Ｍｉｌｉｐｏｒｅ公司）；移液枪；ＦＡ２０１４Ｂ电子天平（上海 越平科学仪器有限公司）；Ａｇｉｌｅｎｔ １２６０型自动进样 高效液相色谱仪，美国安捷伦有限公司（Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ， ＣＡ，ＵＳＡ）；色谱柱Ａｇｉｌｅｎｔ ５ ＴＣ—Ｃ １８（２）２５０× ４．６ ｍｍ；ＷＬ一１００型打粉机（威力制药机械厂）；旋 转蒸发仪，超声机、烘箱。 １．３试剂 超纯水（电阻率大于ｌ８．２ Ｍ·Ｑｃｍ ）；甲醇（色 谱纯）；浓氨（分析纯）；延胡索乙素（ＨＰＬＣ＞９８％）。 ２方法与结果 ２．１样品前处理 采挖合肥大蜀山自然休眠５个月的野生延胡索 块茎（此时颓废组织已形成），洗净后于烘箱中６０℃ 恒温烘６ ｈ，阴干保存一天左右。用刀片剥离出颓废 组织、表皮、韧皮部、木质部及髓，分离后继续阴 干，至完全干燥后分部位用捣药罐捣碎，过药典３ 号筛。 ２．２色谱条件 色谱柱Ａｇｉｌｅｎｔ ５ ＬＣ－ＴＣ１８（２）２５０ ｘ４．６ ｍｍ；流 动相为甲醇．水（６９：３１），等度洗脱，检测波长 ２８０ ｎｍ；流速１．０ ｍＬ·ｍｉｎ～，进样量５ Ｌ，柱温 ２８℃。 ２．３溶液的制备 ２．３．１对照品溶液的制备精密称取延胡索乙素对 照品０．５３ ｍｇ置２５ ｍＬ容量瓶中，加甲醇至刻度线 定容，用移液枪精密移取１ ｍＬ母液和４ ｍＬ甲醇， 混合配成１ ｍＬ含４．２４ ｇ延胡索乙素的对照品贮备 溶液。 ２．３．２供试品溶液的制备精密称取各组样品粉末 （过三号筛）约０．５ ｇ，置锥形瓶中，加入现配好的浓 氨试液一甲醇（１：２０）混合溶液５０ ｍＬ，冷浸３０ ｍｉｎ后， 超声３０ ｍｉｎ。摇匀，抽滤。续滤液用旋转蒸发仪蒸 干，残渣加甲醇（色谱纯）溶解，转移至５ ｍＬ量瓶 中，并用甲醇（色谱纯）稀释至刻度，摇匀。用５ ｍＬ ·８２６· 一次性注射器吸取约１．５ ｍＬ样品，溶液用０．２２ ｍ 过滤针头滤过，取续滤液于２ ｍＩ 的干燥洁净的进样 瓶中，编号即得。 ２．４线性关系考察 精密吸取延胡索乙素对照品溶液５、７、１０、１５、 １７、２０ 在上述色谱条件下进样，测得峰面积值， 以峰面积值和进样量进行回归处理，以峰面积（Ｙ） 为纵坐标，以对照品的进样量（Ｘ， Ｌ）为横坐标， 纵到标准为曲线得回归方程Ｙ＝３．２０９Ｘ＋０．１３６ １， ｒ＝０．９９９ ９，呈良好的线性关系。结果见图１。 ７０ ６０ ５０ ４ｏ 恒３Ｏ ２０ ｌ０ ０ 进样量 ， ） 图１延胡索乙素标准曲线 ２．５精密度实验 精密吸取延胡索乙素对照品溶液１０ Ｌ，按 上述色谱条件重复进样６次，测定峰面面积值， 延胡索乙素的峰面积的ＲＳＤ ）：０．８８７ ９％，结 果见表１。 表１延胡索标准品精密度实验结果统计表（ｎ＝６） ２．６稳定性试验 分别取延胡索同一份供试品溶液，按照２．３条 件下的方法进行提取，采用上述２．２色谱条件，在 ９、１２、１５、１８、２１、２４、３、６ ｈ进样５ Ｌ测定， 延胡索乙素的峰面积的ＲＳＤ ＝０．７１５ ６％，结果 见表２。 ２．７重复性实验 取同一批延胡索药材样品５份，按２．３条件下 的方法进行提取，依照２．２色谱条件进样５ ，其 ２０１８年７月 第２０卷第７期 中国现代中药Ｍｏｄ Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ 表３延胡索样品重复性实验结果统计表（ ＝５） 延胡索乙素的峰面积的ＲＳＤ ５ ：１．６５２ １％，结果 见表３。 表２延胡索样品稳定性实验结果统计表（ｎ＝８） ． ２．８加样回收率实验 取同批延胡索药材粉末６份０．５ ｇ，精密称定， 按照上述提取方法及色谱条件进行延胡索乙素含量 测定，另外加标准品０．２０ ｍｇ，测得其延胡索乙素总 含量，平均回收率为９６．９ｌ％，ＲＳＤ ６）＝１．５６１％， 结果见表４。 表４延胡索样品加样回收结果统计表 ２．９样品含量测定 典３号筛。按照２．３条件下对剥离的不同部位进行提 ２．９．１ １１月份延胡索块茎不同部位延胡索乙素测定 取，在２．２色谱条件下进样。结果见表６。 １ １月份采挖合肥大蜀山野生延胡索洗净后于烘 表６ １２月份延胡索不同部位延胡索乙素含量测定 箱中６０℃恒温烘６ ｈ，阴干保存１ｄ左右。用刀片将 结果统计表 延胡索剥离为３部分：颓废组织及表皮、韧皮部、 木质部及髓，分离后继续阴干。至完全干燥后分部 位用捣药罐捣碎，过药典３号筛。按照２．３条件下 对剥离的不同部位进行提取，在２．２色谱条件下进 ２．９．３不同产地规格样品中延胡索乙素测定 样。结果见表５。 抽取市场中部分商户的样品，两两一组进行对 表５ １１月份延胡索不同部位延胡索乙素含量 照，将同一商户的货源地视为相同，测定各样品中 测定结果统计表 的延胡索乙素含量，结果见表７。 表７不同产地规格样品延胡索乙素液相结果统计表 ２．９．２ １２月份不同块茎延胡索乙素测定 根据ｌ１月份测定结果，于１２月份采挖合肥大蜀 山野生延胡索洗净后于烘箱中６０℃恒温烘６ ｈ，阴干 保存一天左右。手工剥离延胡索的颓废组织及表皮两 部分。烘干至完全干燥后分部位用捣药罐捣碎，过药 －８２７· ２０１８年７月 第２０卷第７期 中国现代中药Ｍｏｄ Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ ３讨论 ３．１延胡索块茎中延胡索乙素的分布 根据实验结果，在延胡索块茎中的各个部位均 含有延胡索乙素，在相同质量的前提下，木质部及 髓中含量最高，颓废组织及表皮中次之，而占延胡 索块茎主要体积的韧皮部中含量最少，其中颓废组 织较表皮又略高一些。合肥大蜀山的野生品延胡索 乙素含量普遍高于各产地不同等级的栽培品（商品延 胡索），而在这些不同规格等级的商品延胡索中，延 胡索乙素的含量与等级没有必然的相关性，因此也 可说明延胡索乙素在延胡索块茎各部位均有分布， 非在等级高的选货（体积大），即韧皮部多的块茎中 分布多。 ３．２根据产地现状对延胡索加工方式的建议 目前浙江与陕西为延胡索两大主产区，其中陕 西产量最大，但陕西产区由于条件限制，对延胡索 的初加工方法简陋，多以简易大锅水煮，煮后自然 晒干的方式。在水煮过程中皮壳（即颓废组织及表 皮）大量脱落，脱落的皮壳均用风机吹去。本实验的 结果表明，延胡索颓废组织及表皮中尚含有大量的 延胡索乙素，此种加工方式可造成人药部分的大量 浪费，且有文献报道水煮方法虽利于大规模生产， 但会造成延胡索乙素的大量流失＿３ Ｊ。因此建议陕西 产区应设立统一加工点，采用浙江产区直接烘干的 方式，以达到提升药材质量的目的。 ３．３对延胡索商品规格划分的建议 目前市场中延胡索药材规格等级主要分为统货 与选货，以过筛的方式进行划分，二者的价格在市 场上也有区别。本实验的结果表明，如以有效成分 延胡索乙素的含量来衡量药材质量并按质论价，此 种划分方法缺乏一定的合理性。曾有研究表明，剥 离切块的延胡索中生物碱与粒径大小成负相关 ； ·８２８· 也有文献阐明，在粒径大小１０～２０ ｍｍ的延胡索块 茎中，延胡索乙素含量无显著性差异 ，其结论与 本实验市场样品的测定结果相同，因此延胡索等级 划分方式及划分依据有待商榷。 ４结论 延胡索块茎的颓废组织中延胡索乙素含量较高， 因此采收加工中脱落的皮壳仍有很高的药用价值， 对于这一资源应当合理利用。野生延胡索资源虽有 分布，但由于自然生长环境的限制，人工采挖效率 低下，没有产量，因此栽培延胡索仍然是商品的主 要来源。据调查，当前国内栽培延胡索多由浙江引 种，陕西已成为最大产区，但现有的产地加工方式 会造成原药材质量下降，应借鉴浙江产地加工模式 进行改良。１９８４年由原国家医药管理局和卫生部联 合发布的《七十六种药材商品规格标准》，规定延 胡索规格等级为一等：每５０克４５粒以内；二等： 每５０克４５粒以外 Ｊ。目前市场上商品延胡索仍按 照此标准，以粒径大小作为等级划分及确定价格的 主要依据，这一划分方式需要进一步修正。 参考文献 ［１］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典：一部［Ｍ］．北 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