第ｌ２卷第２期 ２０１３年３月 杭州师范大学学报（自然科学版） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ｛Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ） ＶＯ１．１２ ＮＯ．２ Ｍａｒ．２Ｏ１３ 用于亲和分离的链霉亲和素磁性高分子微球的制备 梁媛媛，温汉华，郭卫强，焦艳华 （杭州师范大学生物医药与健康研究中心，浙江杭州３１１１１２） 摘 要：本文使用戊二醛作为偶联剂在氨基磁性高分子微球Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ ＮＨ ）／Ｆｅ。０ 的表面引入链霉亲 合素（ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ，ＳＡ），制备得到链霉亲和素磁性高分子微球（Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ。Ｏ ）．使用扫描电镜（ＳＥＭ）、 紫外光谱（ＵＶ）表征了Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ。Ｏ 的形貌与结构，探讨了反应时间，微球用量对微球表面ＳＡ引入量 的影响，并考察了Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ。Ｏ 对生物素化羊抗人抗体（ＢＩｇＧ）的亲和吸附能力．结果表明当反应时间 为１２ ｈ，Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＮＨ ｚ）／Ｆｅ３Ｏ４用量为７５ ｍｇ时，ＳＡ的引入量可达到２．７／￣ｇ／ｍｇ，Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ３Ｏ４在 室温下能快速和ＢＩｇＧ结合，最大结合量为７．４／￣ｇ／ｍｇ，Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ。０ 与ＢＩｇＧ形成的复合物对热、酸、 碱都表现出很好的稳定性． 关键词：链霉亲和素；磁性高分子微球；亲和分离 中图分类号：ＴＢ３４ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７４—２３２Ｘ（２０１３）０２—０ｌ４５一Ｏ５ ０ 前 言 链霉亲和素（ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ，ＳＡ）是由链霉菌分泌的一种蛋白质，分子量６５ ｋＤ．链霉亲和素分子由４条 相同的肽链组成，肽链中的色氨酸残基能和生物素中的活性基团形成特异性结合．一个链霉亲和素分子能 结合４个生物素分子，二者的亲和常数可达到２．５×１０¨（ｍｏｌ／Ｌ） ［ｒ，且与其他分子非特异性结合率很 低，因此，表面修饰链霉亲和素的磁性高分子微球可用于捕获生物素标记的生物分子，包括生物素标记的 抗原抗体和核酸、蛋白质等，在免疫检测、ＤＮＡ分离检测、细胞分离、蛋白质纯化等领域显示出广阔的应用 前景［ ． 本文将以自制的氨基化磁性高分子微球Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＮＨ ）／Ｆｅ。Ｏ 为原料，戊二醛为偶联剂，制备表 面修饰链霉亲合素的磁性高分子微球Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ。０ ，对其结构和性能进行表征，并考察其对生 物素化羊抗人抗体（ＢＩｇＧ）的亲和吸附能力． １ 实验部分 １．１ 试 剂 苯乙烯（Ｓｔ）（上海凌峰化学试剂有限公司，化学纯，减压蒸馏除去阻聚剂后使用），甲基丙烯酸缩水甘 收稿日期：２０１２－１１－２０ 基金项目：浙江省公益计划项目（２０１０Ｃ３３１３２）；杭州科技计划发展项目（２０１０１１３３Ｎ０４）；杭州师范大学科研启动项目 （ＰＤ１０００２００４００１０４０）． 通信作者：梁媛媛（１９８０一），女，助理研究员，博士，主要从事多功能纳米复合材料研究．Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉａｎｇｙｙ＠ｈｚｎｕ．ｅｄｕ．ａｎ １４６ 杭州师范大学学报（自然科学版） ２Ｏｌ３年 油酯（ＧＭＡ）（上海静超化工有限公司，化学纯，减压蒸馏除去阻聚剂后使用），偶氮二异丁腈（ＡＩＢＮ）（上海 试四赫维化工有限公司，化学纯，用乙醇重结晶后使用），聚乙烯吡咯烷酮（Ｋ一３０）（天津天泰精细化学品有 限公司），己二胺（国药集团化学试剂有限公司，分析纯），链霉亲和素（美国ＮＥＢ公司），生物素化羊抗人抗 体（鼎国生物试剂公司），油酸钠，乙醇，氯化铁，氯化亚铁，氨水皆为市售品． １．２链霉亲和素修饰的磁性高分子微球的制备 （１）Ｐ（Ｓｔ～ＧＭＡ—ＮＨ。）／Ｆｅ。０ 的制备．在５ ｇ自制冻干的Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ）／Ｆｅ。０ 磁性微球 中加入５０ ｍＩ 水和５０ ｍＩ 己二胺，超声１０ ｍｉｎ混合均匀后转移到２５０ ｍｉ 三颈瓶中，机械搅拌，在８０℃时反应１２ ｈ．将反应后的混合液进行磁分离后，用纯水洗涤多次除去多余乙二胺，冻干得到棕黄色的粉末，即Ｐ（Ｓｔ— ＧＭＡ—ＮＨ ）／Ｆｅ ０磁性微球． （２）ＳＡ溶液的配置．用纯水配制磷酸盐（ＰＢ）缓冲液（０．１ ｍｏｌ／Ｉ ，ｐＨ一７．０），进行高压灭菌，将１ ｍｇ 的ＳＡ溶于１ ｍＩ 的ＰＢ溶液中，取２００ Ｉ 装于ＥＰ管中待用． （３）Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＮＨ ）／Ｆｅ。Ｏ 分散液的配置．将５０ ｍｇ Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ ＮＨ ２）／Ｆｅ。Ｏ 微球放人灭菌水中 浸泡，用ＰＢ缓冲液清洗３次后，再加入２．５ ｍＩ ＰＢ，超声分散１０ ｒａｉｎ后待用． （４）ＳＡ在Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＮＨ ２）／Ｆｅ。Ｏ 表面的偶联．取２．５ ｍＩ Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＮＨ。）／Ｆｅ。Ｏ 分散液，加入２ ｍＩ 的戊二醛室温震荡反应６ ｈ，进行磁分离，多次用大量纯水清洗多余的戊二醛后，将磁性微球重新悬浮 在２．５ ｍＩ ＰＢ缓冲液中，然后再加入到装有２００肚Ｉ 的上述链霉亲和素溶液的ＥＰ管中，室温震荡培养６ ｈ．最后将Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ。Ｏ 分散在５ ｍＩ ＰＢ缓冲液中（浓度为１０ ｍｇ／ｍＩ ），４℃保存待用． １．３ Ｐ（Ｓｔ－ＧＭＡ－ＳＡ）／Ｆｅ Ｏ 形貌观察 采用扫描电子显微镜（ＳＥＭ）观察微球的形貌，应用ＳＥＭ照片分析微球的平均粒径Ｅ（Ｄ）．按式１计 算微球的平均粒径，其中， 表示微球的粒径 表示粒径为ｄ 时的微球个数． 砌 ＝＝＝ ㈩ １．４链霉亲合素含量测定 （１）配制不同浓度的链霉亲和素标准溶液，用紫外分光光度计测定其在２８０ ｒｉｍ处的吸光度值，绘制 浓度一吸光度标准曲线，如图１所示． （２）将一定质量的Ｐ（Ｓｔ ＧＭＡ—ＮＨ。）／Ｆｅ （） 微球分 别放人ＥＰ管Ａ中，加入灭菌水浸泡，用ＰＢ缓冲液清洗 ３次，加入２．５ ｍＩ ＰＢ超声混均后加入２ ｍＬ的戊二醛室 ０ ２５ ０ ２０ 温震荡６ ｈ，进行磁分离，然后多次用大量水清洗多余的 戊二醛．再用ＰＢ缓冲液洗涤二次，磁分离除去上清液．将 兰 １ ｍｇ的ＳＡ溶于１ ｍＩ 的ＰＢ溶液中，分别取２００“Ｉ 装 入ＥＰ管Ｂ中，加入２．５ ｍｉ ＰＢ溶液，混合均匀，用紫外 分光光度计测定其在在２８０ ｎｍ处的吸光度值，计为“． 将上述ＳＡ溶液加入到ＥＰ管Ａ中，室温震荡反应６ ｈ， 磁分离取上清，测定其２８０ ｉｌｍ处吸光度值，计为６．则 Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＮＨ。）／Ｆｅ。Ｏ 中ＳＡ的含量用式２计算． 叫一 —— ………窳 ０ ｌ ５ ０ １０ ０．Ｏ５ Ｏ 链霉亲和素浓度／ｒａｇ・ｍ 图１ 链霉亲合素的浓度一吸光度标准曲线 Ｆｉｇ．１ Ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅ ｏｆ ＳＡ ｓｏｌｕｔｉｏｎ 一 式中：６０：Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ ＳＡ）／Ｆｅ。Ｏ 微球ＳＡ含量（ ｇ／ｍｇ）； ：溶液的体积（ｍＩ ）； ｍ：Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ Ｏ 微球的质量（ｍｇ）． 第２期 梁媛媛，等：用于亲和分离的链霉亲和素磁性高分子微球的制备 １４７ １．５ Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ３Ｏ 对ＢＩｇＧ吸附量的测定 （１）配制不同浓度的ＢＩｇＧ标准溶液，用紫外分光光度计测定其在２７５ ｎｍ处的吸光度，绘制其浓度 吸光度标准曲线，如图２所示． （２）分别取ｌ、２、３、４、５ ｍＩ 自制的Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／ Ｆｅ。ｏ ，装入５个ＥＰ管中（编号为１—５），磁分离除净上入２ ｍＩ ＰＢ溶液，混合均匀，用紫外分光光度计测定其在 在２７５ ｎｍ处的吸光度，计为ｎ；然后把它们分别加入到１ ｏ・１６ １ 乏ｏ．１０ ｎ ｎ４ ０．０２ 清液．把２００ Ｌ一定浓度的ＢＩｇＧ装在５个ＥＰ管中，加篓０・０ （ａ） （ｂ） 图４ Ｐ（Ｓｔ－ＧＭＡ－ＮＨ２）／Ｆｅ Ｏ （ａ）和Ｐ（Ｓｔ－ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ３Ｏ （ｂ）的ＳＥＭ照片 Ｆｉｇ．４ Ｔｈｅ ＳＥＭ ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｓ ｏｆ Ｐ（Ｓｔ－ＧＭＡ－ＮＨ２）／Ｆｅ３Ｏ４（ａ）ａｎｄ Ｐ（ｓｔ。ＧＭＡ－ＳＡ）／Ｆｅ３０４（ｂ） 由于ＳＡ在波长２８０ ｎｍ处存在紫外吸收，故可以通过检测反应前后溶液在该处波长的吸光度值变化 １４８ 杭州师范大学学报（自然科学版） ２０１３年 确定ＳＡ是否在Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＮＨ。）／Ｆｅ。Ｏ 表面引入以及引 入量，反应后残液的吸光度值越低，说明ＳＡ在Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ— ＮＨ ）／Ｆｅ。Ｏ 表面的引入量越高．反应前后的溶液紫外光谱 如图５所示．从图中可以看出，反应后溶液在２８０ ｎｌＴｌ处的紫 外吸收峰强度下降，说明溶液中游离的ＳＡ浓度下降，即部 分ＳＡ引入到了Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＮＨ。）／Ｆｅ。Ｏ 表面，按式２可计 算得到Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＮＨ ）／Ｆｅ。Ｏ 表面的ＳＡ的引入量为 ２．７／￣ｇ／ｍｇ． 反应结束后，去除上层残液后，再加入等量ＰＢ，震荡１２ ２５０ ｈ后上清液的吸光度基本不变，说明ＳＡ通过戊二醛偶联作 用共价连接于Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＮＨ：）／Ｆｅ。Ｏ ，而不是以物理吸附 ３００ ３５Ｏ 波长／ｎｒｎ 图５ 反应前（ａ）后（ｂ）溶液的紫外吸收图谱 Ｆｉｇ．５ Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＵＶ—Ｖｉｓ（ａ。ｂ）ｓｐｅｃｔｒａ ｂｅｆｏｒｅ ａｎｄ ａｆｔｅｒ ＳＡ ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ 方式作用于微球表面Ｌ４ｊ． ２．３反应条件优化 ２．３．１ 反应时间 考察反应时间对ＳＡ在Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ＿ｓＡ）／Ｆｅａ０４表面引入量的影响 将Ｐ（Ｓｔ ＧＭＡ－ＮＨ。）／Ｆｅａ０４与戊二 醛的反应时间计为ｔ ，进一步偶联ＳＡ的反应时间计为ｔ ，实验结果如表１所示．从表１中可看出，当￡ 保持２ ｈ不变，适当延长ｔ ，ＳＡ的引入量有所增加，但延至６ ｈ后不再增加．保持 为６ ｈ，随着￡。的增加，ＳＡ的引入 量增加，当 等于６ ｈ时，再延长反应时间，残液的吸光度值基本保持不变，说明ＳＡ已和Ｐ（Ｓｔ－ＧＭＡ－ＮＨ ）／ Ｆｅ。Ｏ４反应完全．故￡ 和ｔ 均为６ ｈ时，可获得具有最大ＳＡ修饰量Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ－ＮＨ２）／Ｆｅ。（ 微球． ２．３．２磁性微球用量 图６是不同用量的Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＮＨ ）／Ｆｅ。Ｏ 微球对ＳＡ引入量的的影响．从中可看出，随着微球用量 增加，ＳＡ的引入量增加，当微球用量为７５ ｍｇ时，ＳＡ在微球表面的引入量已到达饱和，Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ ＮＨｚ）／Ｆｅ。Ｏ 表面ＳＡ的最大修饰量为２．７／￣ｇ／ｍｇ． 表１ ＳＡ引入量和反应时间的关系 Ｔａｂ．１ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ｏｎ ｔｈｅ ＳＡ ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ ｂＤ ｔ ——Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＮＨ ）／Ｆｅ。Ｏ 和戊二醛的反应时间； Ｐ（Ｓｔ－ＧＭＡ—ＮＨ：）／Ｆｅ Ｏ 用量／（ｍｇ） ｔ ——进一步偶联ＳＡ的时间； ｎ——反应前ＳＡ溶液的吸光度值； 图６ ＳＡ引入量和Ｐ（Ｓｔ－ＧＭＡ－ＮＨ２）／Ｆｅ３Ｏ 用量的关系 Ｆｉｇ．６ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｑｕａｎｔｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ－ＮＨ２）／Ｆｅ３ Ｏ４ ｏｎ ｔｈｅ ＳＡ ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ ６——反应后上层残液的吸光度值． ２．３．３ Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ。Ｏ 对ＢＩｇＧ吸附作用 链霉亲和素分子由４条相同的肽链组成，肽链中的色氨酸残基能和生物素中的活性基团形成特异性 结合，为了考察Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ～ＳＡ）／Ｆｅ。Ｏ 对ＢＩｇＧ有特异亲和作用能力，考察了Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ。Ｏ 对 ＢＩｇＧ的结合量与时间的关系，结果如图７所示．从图７中可看出，在３０ ｍｉｎ内，Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ。Ｏ 对 第２期 梁媛媛，等：用于亲和分离的链霉亲和素磁性高分子微球的制备 １４９ ＢＩｇＧ结合量可达到７．４￣ｇ／ｍｇ，再延长反应时间，结合 量无明显变化．说明Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ。Ｏ 微球能在 较短时间内捕获溶液中游离的ＢＩｇＧ，其吸附容量与市 售的Ｄｙｎａｂｅａｄｓ⑩Ｍ一２８０磁珠相当． 为了考察Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ。Ｏ 与ＢＩｇＧ形成复 合物的稳定性，将其分别进行如下处理： （１）加入ＰＢＳ，在５０℃震荡６ ｈ． （２）加入ＨＣ１，调节ｐＨ值为１．０，震荡６ ｈ． （３）加入ＮａＯＨ，调节ｐＨ值为１３．０，震荡６ ｈ． 反应时问／ｍｉｎ 磁分离除去复合物，检测上层清液的紫外吸光度 图７ Ｐ（Ｓｔ－ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ，０４对ＢＩｇＧ的吸附量与 值，均未发生明显变化，说明Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ～ＳＡ）／Ｆｅ。Ｏ 与 好的稳定性，也进一步说明了ＢＩｇＧ是通过与微球表面时间的关系 ｔｈｅ Ｐ（Ｓｔ－ＧＭＡ ＳＡ）／Ｆｅ３０ ＢＩｇＧ形成复合物未发生解离，对热、酸、碱均表现出良 Ｆｉｇ．７ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｏｎｔａｃｔ ｔｉｍｅ ｏｎ ＢＩｇＧ ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ ｏｎ 的链霉亲和素特异亲和作用而固定于微球表面，而不是通过非特异的物理吸附作用与磁性微球结合． ３ 结 论 （１）用戊二醛作交联剂，在Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＮＨ ）／Ｆｅ。Ｏ 表面引入链霉亲合素，微球平均粒径为２．２ ｍ， 粒径分布均匀． （２）考察了反应时问和Ｐ（ｓｔ—ＧＭＡ—ＮＨ ）／Ｆｅ。Ｏ 磁性微球用量对ＳＡ引入量的影响，当Ｐ（Ｓｔ－ＧＭＡ— ＮＨ ）／Ｆｅ。Ｏ 微球偶联戊二醛，再偶联链霉亲合素的反应时间均为６ ｈ，磁性微球用量为７５ ｍｇ时，ＳＡ引 入量可达到２．７／￣ｇ／ｍｇ． （３）考察了Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ。Ｏ 对ＢＩｇＧ的亲和结合能力，结果表明（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ。Ｏ 能快 速与ＢＩｇＧ结合，０．５ ｈ内即可反应完全，ＢＩｇＧ最大结合量为７．４ ｐｔｇ／ｍｇ，所形成的Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／ Ｆｅ。Ｏ 一ＢＩｇＧ复合物对热、酸、碱都表现出很好的稳定性． 参考文献： ［１］Ｇｒｅｅｎ Ｎ Ｍ．Ａｖｉｄｉｎ ａｎｄ ｓｔｒｐｔａｖｉｄｉｎ［Ｊ］．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ，１９９０，１８４（３）：５ｉ－６７． ［２３沈关心，周汝麟．现代免疫学实验技术［Ｍ］．武汉：湖北科学技术出版社，２００２：２２３． ［３３温汉华，梁媛嫒，黄志坚，等．分散聚合法制备含环氧基团的磁性高分子微球［Ｊ］．杭卅Ｉ师范大学学报：自然科学版，２０１１，１０（２）：１４１—１４４． ［４］Ｓａｖａｇｅ Ｄ，Ｍａｔｔｓｏｎ Ｇ，Ｄｅｓａｉ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ａｖｉｄｉｎ—Ｂｉｏｔｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ａ Ｈａｎｄｂｏｏｋ［Ｍ］．Ｒｏｃｋｆｏｒｄ：Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ，１９９２：７９． Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ Ｍａｇｅｎｔｉｃ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｆｆｉｎｉｔｙ Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ＬＩＡＮＧ Ｙｕａｎｙｕａｎ，ＷＥＮ Ｈａｎｈｕａ，ＧＵＯ Ｗｅｉｑｉａｎｇ，ＪＩＡＯ Ｙａｎｈｕａ （Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｒｅ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｈｅａｌｔｈ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１１１２１．Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｐｏｌｙｍｅｒ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ Ｐ（Ｓｔ～ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ３ Ｏ４ ｗａｓ ｐｒｅｐａｒｅｄ ｂｙ ｉｎｔｒｏｄｕｃｉｎｇ ｂｉｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ（ＳＡ）ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｏｆ Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＮＨ２）／Ｆｅ３ Ｏ４ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ａｉｄ ｏｆ ｇ１ｕｔａｒａ１ｄｅｈｙｄｅ ａｓ ｃｒｏｓｓｌｉｎｋｉｎｇ ａｇｅｎｔ．Ｔｈｅ ｐａｐｅｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ｔｈｅ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ ａｎｄ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ３ Ｏ４ ｂｙ ＳＥＭ ａｎｄ ＵＶ，ｄｉｓｃｕｓｓｅｄ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｔａｋｅ ｏｆ ＳＡ，ａｎｄ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｔｈｅ ａｆｆｉｎｉｔｙ ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ— ＳＡ）／Ｆｅ３０４ ｔｏ ＢＩｇＧ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｉｎｔａｋｅ ｏｆ ｃａｎ ｒｅａｃｈ ｔｏ ２．７／￣ｇ／ｍｇ ｉｎ １２ ｈｏｕｒｓ ｗｈｅｎ ｔｈｅ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＮＨ２）／ Ｆｅａ ０４ ｄｏｓａｇｅ ｉｓ ７５ ｍｇ．Ｐ（Ｓｔ—ＧＭＡ—ＳＡ）／Ｆｅ３ Ｏ４ ｉｓ ａｂｌｅ ｔｏ ｃｏｍｂｉｎｅ ｗｉｔｈ ＢＩｇＧ ｔｏ ｆｏｒｍ ｓｔａｂｌｅ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ ｕｎｄｅｒ ｍｉｌｄ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｗｈｉｃｈ ａｒｅ ｓｔａｂｉｌｅ ｔｏ ｈｅａｔ，ａｃｉｄ ａｎｄ ａｌｋａｌｉ，ａｎｄ ｔｈｅ ｍａｘｉｍｕｍ ＢＩｇＧ ｂｉｎｄｉｎｇ ｃａｐａｃｉｔｙ ｉｓ ７４ ｐｔｇ／ｍｇ． ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ；ｍａｇｎｅｔｉｃ ｐｏｌｙｍｅｒ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ；ａｆｆｉｎｉｔｙ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ